研发服务

与小分子药物相比，大分子药物具有结构复杂，对外界条件敏感的特性。大分子药物的研发需要一套全面的可定量的、准确且精确的生物分析Assay。针对GPCR的大分子药物筛选，我们开发了一整套的功能性生物活性检测Assay，可在研发早期快速筛选到功能性抗体。

 ￭ 细胞内钙离子浓度变化荧光检测法

GPCRs信号通过Gq、Gi/o等G蛋白介导细胞内钙释放，通过钙离子敏感荧光探针即可检测GPCRs功能的变化。采用FLIPR以每小时获取3万个以上的数据点的通量实现GPCRs的高通量筛选。

 ￭ Tango检测系统

当配体与特异性GPCR结合，活化的GPCR招募β-arrestin。通过在β-arrestin后连接TEV蛋白酶，被标记的TEV蛋白酶剪切与GPCR的C末端融合的TEV位点，释放出非天然转录因子tTA，后者进入细胞核，调节β-内酰胺酶报告基因的表达，通过检测报告基因的表达水平判断GPCRs的活性。

 ￭ cAMP检测法

GPCRs信号通过Gi或Gs会导致细胞内cAMP水平的上升或下降，检测cAMP的水平也可实现对GPCRs的筛选。

 ￭ 迁移实验

采用Transwell孔板，上室加入趋化因子受体高表达细胞，下室加入相应的趋化因子，细胞会穿过聚碳酸酯膜进入下室。当在上室加入不同浓度梯度的抗体或化合物时，计数进入下室的细胞量可反映抗体或化合物对于细胞趋化的影响。

 ￭ ADCC实验

抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）是免疫系统对抗病毒感染及肿瘤疾病的一种重要免疫防疫机制。抗体通过与靶细胞表面抗原特异性结合，招募NK细胞等效应细胞杀死靶细胞。

采用基因工程改造的Jurkat细胞作为效应细胞，该细胞稳定表达FcγRIIIa受体和NFAT应答元件驱动表达的萤火虫荧光素酶。抗体与效应细胞表面的受体结合后，激活细胞内NFAT反应元件，NFAT反应元件驱动荧光素酶的表达，通过生物发光可进行定量检测。

 ￭ 内吞实验

抗体与细胞膜上靶蛋白特异性结合，通过胞饮的形式内吞，以此来筛选ADC的抗体分子；

抗体与靶蛋白结合，也可促进靶蛋白的内吞，以此来筛选调节靶蛋白内吞的抗体分子。